
マウス
JAX®Mice
Coisogenic
遺伝子改変
The Jackson Laboratory から2026年にジャクソン・ラボラトリー・ジャパンへ導入し、2026年11月より供給を開始しました。
ジャクソン・ラボラトリー・ジャパンから生産・供給されるJAX®Miceは、The Jackson LaboratoryのJAX®Miceです。遺伝学的に分岐した亜系統ではありません。
JAX® Mice C57BL/6J- Ptprc em6Lutzy /J (JAX® Mice Strain #:033076)のサイト情報
毛色:Black
規格:4~8週齢
《使用に際してのご注意≫
【系統の概要説明】
JAXBoy(PtprcK302E) は、Ptprc遺伝子 にCRISPRによるゲノム編集を加えて作製された C57BL/6J のコアイソジェニック系統です。ゲノム編集によりPtprc タンパク質の構造が変わり、C57BL/6Jが本来発現する Ptprcb アレルを認識するCD45.2(Ly5.2)の抗体ではなく、SJLが本来発現するPtprca アレルを認識する CD45.1(Ly5.1)の抗体に認識されます。競合的骨髄移植の生着効率において、 JAXBoyのCD45.1で認識される細胞はC57BL/6J のCD45.2と差がなく同等です。CD45.1およびCD45.2白血球マーカーは、どちらも市販の抗体を用いたフローサイトメトリーにより容易に検出可能です。
【由来】
JAXBoyアレル(PtprcK302E)は、ジャクソン研究所において、CRISPR/Cas9エンドヌクレアーゼを用いたゲノム編集技術により作製されました。第1染色体上に位置するProtein Tyrosine Phosphatase Receptor Type C遺伝子(Ptprc)の10番目のエキソンを標的とするガイドRNAを用いました。また、302番目のアミノ酸であるリシンをグルタミン酸に置換する変異(K302E;AAA→GAA)をコードするオリゴヌクレオチド・ドナーDNAを作製しました。さらに、標的効率を高めるためにサイレント変異であるN303N(AAC→AAT)も導入されました。これらの配列とCas9ヌクレアーゼをC57BL/6Jの受精卵に導入し、偽妊娠状態の雌マウスに移植しました。得られた産仔についてDNAシーケンシングによるスクリーニングを行い、目的の変異が正しく導入された個体を選別しました。その後、これらの個体をC57BL/6Jと交配させ、変異が次世代へ確実に受け継がれている(生殖系列伝達)ことを確認しました。JAXBoyコロニーは、C57BL/6J系統に対して少なくとも2世代にわたり戻し交配が行われました。
【詳細】
受容体型Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type C遺伝子(Ptprc;CD45またはLy5とも呼ばれる)は、白血球に発現するProtein Tyrosine Phosphataseをコードしており、T細胞およびB細胞の活性化に不可欠です。 本系統が持つPtprcem6Lutzy アレルは、CRISPR/Cas9エンドヌクレアーゼを用いたゲノム編集により、Ptprc遺伝子のエキソン10にK302E変異(アミノ酸置換)を導入して作製されました。この置換によってタンパク質の構造が変化し、モノクローナル抗体によってPtprcaアイソフォーム(CD45.1またはLy5.1)として認識されるようになります(Francois et al,2016
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27185283/
)。このように、JAXBoyでは、C57BL/6Jが本来発現するPtprcb(CD45.2またはLy5.2)ではなくPtprcaとして認識されるため、ドナーまたはレシピエントとして、競合移植実験に適しています。さらに、本系統を用いることで、SJLの戻し交配によって得られたこれまでの類似系統で問題となっていた、SJL由来の遺伝的背景に起因する実験上の不確実性を完全に排除することができました(Danielle et al,2019
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31248780/
)。ジャクソン研究所における市販の抗体を用いたフローサイトメトリーの解析でも、 SJLの戻し交配により得られたC57BL/6JコンジェニックCD45.1系統であるPep Boy(
系統番号:002014
)と比較して、 JAXBoyの末梢血白血球 のCD45.1の発現パターンは移植の前後を問わず同様でしたが、 SJL由来の遺伝子背景の影響を受けないため、 C57BL/6J のCD45.2と同等の生着が確認できました。 ヘテロ接合型およびホモ接合型のいずれのマウスも生存可能であり、繁殖能力も有しています。